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产品用途：用于精确检测奶粉、牛奶、酸奶等乳制品及饲料样本中三聚氰胺的残留量。
产品特点：
1、灵敏度高，试剂盒灵敏度为3ppb；
2、室温条件即可完成检测实验；
3、可批量检测样品，每批次检测50分钟内即可出结果；
4、检测结果稳定，变异系数小；
二、试验原理
五、使用单位需自备的设备及试剂
设备：
试剂：
六、提供的材料与试剂
七、溶液的配制
八、样本前处理步骤
产品说明：
一、概要
三聚氰胺是一种低毒、无味的纯白色单斜棱晶体，形似蛋白 粉，属于三嗪类含氮杂环化合物，广泛应用于塑料、染料、化肥的生产和纺织行业。由于三聚氰胺分子含氮量很高，只要添加到食品中就可在检测中造成蛋白质含量较高的假象。目前在饲料、牛奶、奶粉、饼干、奶糖等相关产品均发现有三聚氰胺残留现象。动物实验结果表明，三聚氰胺的摄入可能会导致繁殖障碍、膀胱炎、慢性肾炎、肾结石、甚至膀胱癌。现有的检测三聚氰胺方法如液相色谱-质谱联用法、质谱电喷射离子技术其样品前处理复杂、所需仪器昂贵、操作复杂、耗费时间。而使用三聚氰胺ELISA试剂盒能够既快速又准确的分析样品中三聚氰胺残留。
本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，操作时间短于45min，能限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被三聚氰胺抗原，样本残留的三聚氰胺和微孔条上预包被的抗原竞争抗三聚氰胺抗体，加入TMB底物显色，样本吸光值与其残留物三聚氰胺成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺的含量。
三、适用范围
可定性、定量检测奶粉、牛奶、酸奶等乳制品及饲料样本中三聚氰胺的残留量。
四、交叉反应率
三聚氰胺………………………………………………100％
五、使用单位需自备的设备及试剂
设备：
┅┅微孔板酶标仪450/630nm
┅┅涡旋仪
┅┅天平：感量0.01g
┅┅聚苯乙烯离心管
┅┅微量移液器
试剂：
----去离子水
----乙腈（分析纯）
六、提供的材料与试剂
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组份名称
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96T装量
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48T装量
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酶标板
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96T
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48T
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标准品×6瓶*
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1 ml |
0.5 ml |
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三聚氰胺酶标物
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6 ml |
3 ml |
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三聚氰胺抗试剂
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6 ml |
3 ml |
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显色液
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12 ml |
6 ml |
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终止液
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6 ml |
3 ml |
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浓缩洗涤液（10×）
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40 ml |
20 ml |
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样品稀释液
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40ml
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20 ml |
*注：标准品浓度为0 ppb, 3 ppb, 9 ppb, 27 ppb, 81ppb,243ppb。
依次编号①②③④⑤⑥
七、溶液的配制
配液1：1×洗涤工作液
用去离子水将浓缩洗涤液（10×）按1 : 9体积比进行稀释，即1份浓缩洗涤液（10×）+9份去离子水；用于酶标板的洗涤，1×洗涤工作液在4 ℃环境可保存一个月。
八、样本前处理步骤
样本处理前须知：
（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（b）实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。
（c）未处理的样本冷冻保存。
（一）奶粉前处理方法
┅┅称1g奶粉样本，加10ml去离子水，充分振荡2～3min，4000rpm离心10min。
┅┅弃去上层脂肪层，吸取中间层液体100ul用于分析。
样本稀释倍数：10
（二）适用于生鲜奶、成品纯牛奶：
┅┅将牛奶样本用4000rpm离心10min；
┅┅弃去上层脂肪层，吸取中间层液体100ul用于分析。
样本稀释倍数：1
（三）发酵乳/奶油
┅┅取5g样品，加入10ml乙腈，剧烈振荡5min，过滤或于4000r/min离心5min，取1ml滤液或上清，于50℃下氮气吹干，加入1ml样品稀释液和0.5ml石油醚，振荡混匀，于3800 r / min下离心5min，将下层液体转移到另一洁净离心管中，用于检测。
样本稀释倍数：3
九、检测步骤
测定前应须知：
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。
2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。
操作步骤：
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25 ℃）平衡30 min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8 ℃。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本：加标准品/样本50 ml/孔到对应的微孔中，再加入酶标物50 ml/孔，再加入抗试剂50 ml/孔轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25℃避光环境中反应30 min。
6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300 ml/孔，充分洗涤5次，每次间隔10 s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
7、显色：加入显色液100 ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25℃避光环境反应10min。
8、测定：加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630 nm检测，请在5 min内读完数据），测定每孔OD值。（若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定）。
十、 结果判定
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，而定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含三聚氰胺成负相关。
1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.677，样本2的吸光度值为1.375，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.730；3ppb为1.464；9ppb为1.197；27ppb为0.738；81ppb为0.347；243ppb为0.155。则样本1的浓度范围是27ppb～81ppb；样本2的浓度范围是3ppb～9ppb。再乘以其对应的稀释倍数即可得出样本中三聚氰胺的浓度范围。
2、定量分析
（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以个标准（0标准）的吸光度值，再乘以，即
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百分吸光度值（%）＝
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B
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×
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B0
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B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0（ppb）标准溶液的平均吸光度值
（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以三聚氰胺标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中三聚氰胺实际残留量。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）
十一、检测方法灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度：3 ppb
样本检测限：
奶粉……………………………………………………30ppb
发酵乳/奶油……………………………………………9ppb
纯牛奶、生鲜奶…………………………………………3ppb
回收率：
奶粉…………………………………………………100±10%
酸奶…………………………………………………80±10%
纯牛奶、生鲜奶……………………………………100 ± 10%
精密度：
试剂盒的变异系数均小于10%
十二、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8、在加入底物液后，一般显色时间为10～15min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20min（或更长），但不得超过20min。反之，则减短反应时间。
9、该试剂盒反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
十三、贮藏条件及保存期
贮藏条件：保存试剂盒于2～8℃。
保存期：该产品有效期为12个月。